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99条搜索结果:
Q 关于饱和曲线(Saturation)的三张曲线图都有什么意义? 展开 收起
A

A:HTML报告中的饱和度分析可评价测序数据的整体质量,为提高计算效率,在bin200维度下从成功注释reads中进行小样本随机抽样,故同一数据多次运行的结果可能略有区别,拟合公式不完全相同,但曲线整体形态一致。

图1:对抽样样本中的Unique Reads(CID、geneName和MID都唯一的reads)进行统计,饱和度值=1-(Unique Reads)/(Total Annotated Reads),随着抽样量增加,拟合曲线近平缓代表数据趋于饱和,是否加测需根据项目整体设计和样品情况而定,例如珍贵样品建议可加测,报告中的阈值0.8只作为建议指导的提示。

图2:随机抽样数量增加,bin200维度下的基因中位数逐渐增加。

图3:根据随机抽样样本的Unique Reads数据拟合而出的曲线,拟合曲线R² >=0.9。

(注:三张图片的x轴相同,y轴分为饱和度值、基因中位数和Unique Reads数量)

33333



Q stereoPipeline.sh 脚本中哪个参数能将Bin200调整成Bin20? 展开 收起
A

可通过spatialCluster模块中的-s参数设置不同的binsize选择,但需注意SAW直接输出的聚类结果默认只支持Bin200的结果展示,仅作为一个大致的参考。如果要进行更精确的聚类,推荐您使用Stereopy进行下游分析,这部分分析是在SAW之外的。

Q StereoMap 只是单纯的可视化软件吗? 展开 收起
A

主要是可视化的功能,此外,如果配准异常,手动配准功能也可以通过StereoMap来实现。

Q 如何解析GEF格式文件? 展开 收起
A

Option1:使用C++编译的 geftools:

1. https://github.com/BGIResearch/geftools


Option2:使用python包 gefpy:

1. https://pypi.org/project/gefpy/

2. https://gefpy.readthedocs.io/en/latest/index.html

3. pip install gefpy==0.6.1


Option3:如已安装SAW sif(如v5.1.3):

1. https://hub.docker.com/repository/docker/stomics/saw

2. singularity exec SAW_v5.1.3.sif cellCut

3. 请使用singularity 3.8及以上版本

Bash
 
export HDF5_USE_FILE_LOCKING=FALSE
  ## gef2gem using geftools
  geftools view -i
<SN>.gef -o <SN>.gem -s <SN>
  # -i input square bin GEF, e.g.SN.raw.gef or SN.gef
  # -o output GEM
  # -s SN
 
  ## gef2gem using gefpy
  python
  >>> from gefpy.bgef_reader_cy import BgefR
  >>> bgef=BgefR(filepath='
<SN>.gef',bin_size=200,n_thread=4)
  >>> bgef.to_gem('
<SN>.bin200.gem')
 
  ## gef2gem using SAW sif
  ## export SINGULARITY_BIND="/path/to/input/dir,/path/to/output/dir"
  singularity exec SAW_v5.1.3.sif cellCut view -i
<SN>.gef -o <SN>.gem -s <SN>
 
  ## cgef2cgem
  geftools view -i
<SN>.cellbin.gef   -o <SN>.cellbin.gem   -d <SN>.raw.gef   -s <SN>
  # -i input cellbin GEF
  # -o output cellbin GEM
  # -d input square bin GEF, e.g. SN.raw.gef or SN.gef
  # -s SN
 
  ## gem2gef
  geftools bgef -i
<SN>.gem -o <SN>.gef -b 1,20,50 -O Transcriptomics
  # -i input square bin GEM
  # -o output square bin GEF
  # -b bin sizes seqarate by comma, default: 1,10,20,50,100,200,500
  # -O omics name


Q MID是什么?MID是表示每个分析单元检测到的转录本数目吗? 展开 收起
A

MID(Molecular ID)即分子编码,实验过程中每个mRNA分子带有唯一的MID,用于区分来源于不同mRNA分子的PCR扩增子。MID(即UMI)代表每个基因在每个分析单元中检测到的转录本数目。

Q gef文件比较多,分别代表什么含义? 展开 收起
A

{SN}.gef代表整张芯片全部数据,{SN}.tissue.gef代表组织区域数据,{SN}.cellbin.gef代表细胞分割后的数据,这三个gef文件是主要输出数据,是下游分析会使用到的,其他gef后缀文件,可以参考说明手册(时空官网链接:https://www.stomics.tech/products/BioinfoTools/OfflineSoftware/SAWOperationManual)<附录和参考文献>模块中的附录B。

Q 准备试剂时,血清、一抗和二抗都需要14000g 离心10 min,离心是原液离心还是稀释后的离心,离心的目的是什么? 展开 收起
A

主要目的是去除杂质,因为试剂中含有杂质,所以要离心。按照试剂盒使用说明书操作即可。

Q 时空芯片与mIF 共检测技术里,不用FcR对染色和后续的捕获会有影响吗?比如只有针对小鼠和人的FcR,没有猴的。 展开 收起
A

FcR主要封闭非特异性抗原结合的位点,如果不封闭,会与目标抗原非特异性结合而影响目标位点的判断。请登录BioLegend 官网查询是否有针对猴的,或者咨询一下抗体公司。

Q mIF流程实验中,抗体滴定实验的目的是什么? 展开 收起
A

主要目的有:(1)确保选择的抗体适配于时空组学的mIF实验,可表达出正确的pattern;(2)根据滴定实验可以判断最佳的抗体浓度。

Q 针对mIF流程,摸索透化时间的实验中,不添加一抗和二抗,是否会影响转录组实验的透化时间的确定? 展开 收起
A

经过测试一抗、二抗添加与否并不影响透化时间的判断,只需要模拟前面的试剂孵育流程即可。

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