Q
制作50% OCT过程中，用50%体积的无核酸酶水和OCT混合的时候，总是水在上面，OCT在下面，这种情况能否用涡旋混匀？
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A
可以剧烈涡旋混匀，注意一定要充分混匀。混匀过程中会有大量气泡产生，高速离心去除气泡即可。
Q
Leica的冷冻包埋剂是否可以用于时空实验？
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A
OCT试剂只测试过SAKURA Tissue-Tek® O.C.T. Compound（SAKURA，4583），除此之外，还测试过明胶包埋剂（Sigma-C5678-500G USA）和CMC包埋剂（Sigma-48722-500G-F USA）。以上三种经过测试的包埋剂可以用于时空实验，其他未测试过的包埋剂不推荐使用。
Q
是否可以把不同组织类型的组织包埋在同一个包埋块中？
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A
不建议这样操作，不同组织类型的最佳透化时间可能不同，包埋在同一个包埋块中，无法采用同一最佳透化时间，从而可能影响实验结果。
Q
有简化的包埋流程吗？能不用包埋模具吗？
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A
如果您对包埋较为有经验，包埋后的组织不影响切片贴片，且RNA RIN值和H&E染色的组织形态均可满足时空实验要求，可以按照您的经验进行包埋。
Q
液氮冷冻后保存的样本，可以包埋后再用来开展时空实验吗？
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A
可以，但不是目前推荐方案。因为液氮冻存后再用OCT包埋组织需要解冻组织，可能对RNA RIN值和组织形态有影响，切片时也有发生OCT分离的风险。液氮冻存的样本，包埋过程需要尽量快速完成，确保样品不要完全解冻，建议包埋前先做预实验摸索和测试。
包埋后的样本建议尽快开展实验，因为样本长期冻存-80˚C可能会有形变、碎片等风险。
Q
RNA提取过程中是否经过DNase I处理？
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A
针对新鲜组织，我们使用的RNA提取试剂盒是Qiagen 74104 RNeasy Mini Kit (50)，没有经过DNase I处理，详细信息可以参考试剂盒使用说明书。
Q
包埋过程中如果样本有血液残留，使用PBS清洗后需要擦干再包埋吗？残留的血液会影响数据结果吗？
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A
尽量不进行PBS清洗，如果血液过多必须清洗，需要用无菌辅料块擦干（组织表面看不见任何的液体）后再包埋。正式包埋前，可以将组织放入OCT中，用药匙拨动组织，使其在OCT中轻柔滚动几次，尽可能用OCT吸干组织表面的液体。
残留的血液多则会影响包埋和切片，容易产生冰晶；血液少则不会影响包埋和切片，但可视化结果中会有血液相关基因的捕获。
Q
测试芯片染色完成后可以保存多久？
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A
染色完成吹干后，若当天来不及拍照可用锡纸包住，放入冰箱4℃保存，第二天再拍照，若第二天拍摄发现信号较弱可复染。
Q
对于常规时空转录组的H&E染色是否一定需要丙酮？
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A
常规时空转录组不对H&E染色步骤做要求，请按照您所购买的H&E染色试剂protocol进行。对于H&E兼容时空转录的H&E的染色试剂和染色步骤的要求，可以参考该技术的实验protocol。
Q
盐酸是否一定要用推荐的国药、Sigama和东江的品牌？
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