目前针对鼠脑组织有反复取出切片 4 次,暂时未发现对基因捕获量有明显影响。
排除组织类型自身的影响,组织撕裂或者空洞形成有可能以下几方面原因。
(1)缓慢或者不充分冰冻组织过程中形成的冰晶;
(2)是组织包埋过程中引入的气泡;
(3)是贴片过程中,采用的小刷子不合适,损伤冰冻切片。
首先确认刀片是否足够锋利,如果不够锋利,更换新的刀片。防卷板超出刀刃不够容易导致切片卷曲,可以适当调整防卷板。冷冻箱温度相对样品头温度高也会导致切片卷曲,可以通过调节箱体或者样品头温度缓解卷曲的问题。
首先考虑是否组织包埋块复温时间不够,过冷过硬导致切片破碎。同时当样品头温度过低也容易导致切片破碎。除此之外,组织包埋过程中产生了过多冰晶、刀片或防卷板有缺口都会使切片不完整。