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130条搜索结果:
Q STOmics SAW原始入参FASTQ文件的格式和要求? 展开 收起
A

  • STOmics SAW分析流程入参支持成对FASTQ成组FASTQ,支持质量值体系为Q40和Q4。

    • 成对FASTQ:一对 read 文件,通常命名为<slide>_<lane_number>_<read_index>.fq.gz,含read 1 和 read 2,少数情况下可能没有"read"字样。read 1 用于记录 CID、MID 信息,read 2 用于记录探针捕获的 RNA 测序数据。


## read 1

@V350156489L4C001R00100001484/1

TCTGCAGCCAACATGGACAGATCCTTTTAGAACTT

+

D>DC<CBEADEABCB(AADCDD2DD"DBE*$F'C'


## read 2

@V350156489L4C001R00100001484/2

CTATGAAACACACTATCCTCAATCGGCTCCTTAATTTCAATACCAGCCGT

+

ECFCCB?CAECEBDBCCFDFEFDF?<FCF>B?2EC=C?C<CE(AA=;B5B


  • 成组FASTQ:一组16或64个文件,通常命名为<slide>_<lane_number>_<sample_barcode>_<split_index>.fq.gz。少数情况下可能文件前缀中没有barcode,通过文件目录中的barcode目录名区分。read ID 以“@”开头,包括 read 名称和经过编码的 CID 和 MID 信息。同时序列质量信息以Q4方式记录,以降低存储。

image

@FP300000513L1C002R00400000218 CE242DF29A57 97D26

GTGTAGTGAACCCCATGGTAGTTTTCTGATTGTTGTTAAAAAAAATGACTTAACATATTACATGGACACTCAATAAAAATGTTTTATTTCCTGTTGAAAA

+

FFFFFFFFFFFF8F8FFFFFFFFFFFFF8FFFFFFFFF8FF8FFF8FFFFFFF,FFFFFFFFFFF8FFFFFF8F8F,F8FFFFFF,FFFFFFFFFF,FFF

详细信息请查看《SAW 用户手册》运行分析>输入文件>测序 FASTQ。

Q 如果基因组的chr/scaffolds数量较多(例如:超过5000),导致构建参考基因组时提示内存不足,应如何处理? 展开 收起
A

SAW 软件版本 < 8.0,通过设置--genomeChrBinNbits

=min(18,log2[max(GenomeLength/NumberOfReferences,ReadLength)])来降低RAM消耗,例如:14G大小的参考基因组,其chr/scaffolds为90k,根据上述公式,计算发现--genomeChrBinNbits的参数值应设置为17。详情可参考STAR软件的说明手册https://github.com/alexdobin/STAR/blob/master/doc/STARmanual.pdf

Q 对于FFPE样本目前可以做ssDNA染色后再添加邻片H&E图像作为底片加进去用来做组织分割吗?如果用H&E染色来做细胞分割,目前有第三方接入流程吗? 展开 收起
A

1、可以邻片H&E切片圈组织结构,受邻片配准精度限制,组织分割结果需要用户手动介入进行调整;

2、H&E染色做细胞分割,时空StereoMap软件兼容任何第三方软件的细胞分割结果。

Q 时空转录组FFPE测序结果中,lncRNA一般占比是多少? 展开 收起
A

lncRNA MID/Total MID:人样本为6%~12%;小鼠样本为5%~9%(该数据针对部分研发数据分析,因受样本量限制,您的实测数据中该比例可能会略有差异)。

Q 对于FFPE样本的同片H&E染色,分析特殊的区域,是怎么分离出来,生信分析流程怎么操作? 展开 收起
A

在StereoMap软件上直接lasso感兴趣区域即可,StereoMap操作流程可参考时空官网,链接为:https://stomics.tech/service/new-StereoMap.html。

Q 时空转录组FFPE分析结果中,微生物检测,一次能检测到多少种微生物?可以看到捕获的基因数吗? 展开 收起
A

1、对于微生物的检测种类,主要看数据库的选择。我们提供了相对权威的数据库,但用户也可以自己配置其他数据库到流程中;

2、目前对于微生物可以定位到“种”,目前是看不到捕获的微生物基因数。

Q 时空转录组FFPE产品是否支持Cellbin? 展开 收起
A

FFPE转录组产品支持Cellbin,可通过以下两种方式实现:

① 基于ssDNA染色,可以实现Cellbin分割功能(目前主要小鼠样本);

② 时空StereoMap软件兼容任何第三方算法单细胞分割的结果。

Q 时空转录组FFPE可否使用之前的建库试剂盒(货号:101KL114)进行建库,文库可否使用之前的测序试剂盒(货号:1000028455)进行测序? 展开 收起
A

请使用产品名称为:Stereo-seq 16 Barcode建库试剂盒、产品货号为:101KL160的建库试剂盒进行时空转录组FFPE文库的构建。构建出来的文库需要用DNBSEQ-T7RS 时空可视化试剂套装(T7 STO FCL PE75) 货号:940-001895-00或MGISEQ-2000RS 时空可视化试剂套装(G400 STO FCL PE75) 货号:940-001887-00进行测序。

Q 在进行时空转录组FFPE的解交联实验流程中,解交联试剂可以反复预热吗?解交联步骤95℃结束之后是否需要等到下一个反应温度,还是可以拿出芯片? 展开 收起
A

1、解交联试剂可以反复预热;

2、解交联步骤95℃降温后就可以拿出来,不需要等到下一个反应温度

Q 在进行时空转录组FFPE的生化流程中,如果不拍照,不需要看track线,贴片时能100%贴满芯片吗? 展开 收起
A

从技术角度是可以贴满芯片,但是如果切片全覆盖到芯片上,可能存在以下风险点:1. 可能会戳到切片的边角;2. 可能会导致影像图无法识别track线导致QC fail,配准困难。

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